高效液相色谱法检测中药材黄曲霉毒素解决方案

黄曲霉毒素概况：

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，目前已经发现20余种，主要有b1、b2、g1、g2以及m1、m2，这些代谢产物在分子结构上十分接近。黄曲霉毒素具有致癌、致畸、致诱变作用，将抑制蛋白质的组合，干扰rna和dna的合成，导致动物全身性损害，因此近年来各级食品药品监管部门高度重视。国家食品药品监督管理局国食药监安[2012]18号文件中，要求加强对重金属及有害元素、农药残留、黄曲霉霉素等安全性指标的检测和控制，切实保证中药材质量和安全。

黄曲霉毒素检测方法：

黄曲霉毒素检测方法主要有薄层色谱法、酶联免疫法、高效液相色谱法和液相色谱-质谱联用法，其中高效液相色谱（hplc-fld）法具有前处理简单、可实现异构体分离、分离灵敏度高和稳定性好等特点，因而得到了广泛的应用。根据黄曲霉毒素测定有关国家标准，可以采用hplc或者uplc与荧光检测器连接，对样品中的黄曲霉毒素g1、g2、b1、b2及m1进行定量。

中药材黄曲霉毒素检测解决方案：

测定依据：根据2015版《中国药典》2351黄曲霉毒素测定法，黄曲霉毒素b1的限量为5μg/kg，黄曲霉毒素g2、g1、b2总限量为10μg/kg。

适用范围：适合于陈皮、胖大海、僵蚕、酸枣仁、桃仁等多种中药材品种。

⒈样品处理方法

⑴对照品溶液制备：

⑵样品制备：

⑶免疫亲和spe柱净化步骤：

●活化：用10ml pbs活化spe柱；

●上样：准确移取10ml过滤后的样品溶液注入免疫亲和柱，使溶液以1滴/秒的速度通过免疫亲和柱，直至2ml-3ml空气通过柱体，弃去流出液；

●淋洗：用20ml水淋洗免疫亲和柱，流速为1滴/秒—2滴/秒，淋洗两次，直至2ml-3ml空气通过柱体，弃去全部的流出液，抽干小柱；

●洗脱：准确加入1.0ml甲醇洗脱，流速约为1滴/秒，收集全部的洗脱液于干净的离心管中，用流动相定容至2ml，供液相色谱测定。

⒉高效液相色谱分析

由于黄曲霉毒素b1和g1在含水的流动相中易发生荧光淬灭现象，因此需要进行衍生增强荧光信号。光化学衍生法无需任何化学试剂，检测结果准确且灵敏度高，因而被列为药典规定检测方法之一。

⒊注意事项

⑴免疫亲和柱在2——8℃保存，使用前需提前解冻。

⑵由于黄曲霉毒素毒性较大，使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液请用5%次氯酸钠溶液浸泡过夜。

⒋光化学衍生法推荐配置